背景介绍今天我们来学一下，如何使用FIJI或者ImageJ进行免疫组化图片的分析。
关于为什么这样进行分析，建议看一下这篇帖子ImageJ分析免疫组化图片（附ImageJ的多种实用技巧），反正我是看的迷迷瞪瞪的，但是人家确实说的很有道理。
反正都是相对定量的，也不是绝对定量。
下来看一下是如何在软件操作的。
软件下载FIJI本文教程1.找到需要进行分析的图片，直接拖拽进入FIJI2.在这里，我们首先将图片转为8 bit图片3.然后将灰度值转换为OD值：Analyze-Calibrate[为什么要转换成光密度来计算呢？因为如果用灰度来统计，纯白背景的数值为255，DAB着色如果越深，反而数值越小，这个和我们的认知刚好相反。
因此，以光密度值来分析的话，背景纯白的值越是接近于0，DAB着色越深，光密度值越大，就是这样的方法更合理]4.选择Uncalibrated OD，确定，就进行了相应的转换5.在Set Measurements中设置需要测量的参数6.选择Area，Integrated density，Area fraction，Limit to threshold这几个参数，确定7.然后选择Image，Adjust，Threshold，进行面积选中8.调节上下两个部分，使得需要统计的部分处于红色选中状态9.然后点击Analyze-Measure进行面积分析10.然后面积以及面积比就出来了11.最终图片的平均光密度数值就计算出来了，为IntDen/Area=28109.526/73984=0.3812.，怎么样，学会了吗？